?Brainbits Hibernate 培養(yǎng)基是一種不依賴于 CO₂ 的營養(yǎng)培養(yǎng)基，用于維持神經(jīng)細(xì)胞、組織和組織切片。Hibernate  培養(yǎng)基已進(jìn)行優(yōu)化，可用于在環(huán)境二氧化碳水平中維持成熟和不成熟細(xì)胞或組織。Brainbits Hibernate 培養(yǎng)基可讓神經(jīng)元在環(huán)境 CO2 水平下維持長達(dá) 48 小時。這為科學(xué)家在運(yùn)行臺式活細(xì)胞實驗時提供更大的便利和控制，比如顯微鏡、流式細(xì)胞分析以及其他生理學(xué)研究。Brainbits Hibernate 培養(yǎng)基還可在冷藏環(huán)境下保存具有活性的大腦組織直至處理達(dá) 1 個月，以及維持組織切片。

Hibernate A 和 Hibernate E的區(qū)別

Brainbits Hibernate 培養(yǎng)基有兩種類型，Hibernate A 和 Hibernate E。

Hibernate-E is useful for embryonic tissue while Hibernate-A is useful for adult tissue.

Brainbits Hibernate A培養(yǎng)基用于出生后組織樣品。A就是Adult，成年人或者成年動物。

Brainbits Hibernate E培養(yǎng)基用于胚胎神經(jīng)元使用。A就是Embryo，胚或者胚胎。

Brainbits Hibernate 培養(yǎng)基兩種產(chǎn)品的配方相似，主要的區(qū)別的在于滲透壓，Hibernate A培養(yǎng)基的滲透壓范圍高于 Hibernate E培養(yǎng)基。

Hibernate E minus Calcium和Hibernate A minus Calcium的區(qū)別

兩者都是 Hibernate E培養(yǎng)基和Hibernate A培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，不含鈣離子。

Hibernate A minus Calcium培養(yǎng)基的實物圖片

Hibernate E minus Calcium培養(yǎng)基的實物圖片

培養(yǎng)大鼠胚胎海馬神經(jīng)元和大腦皮層神經(jīng)元

1. 從受精18天的大鼠胚胎中分離大腦皮層和雙側(cè)海馬

2. 在預(yù)置了Hibernate E培養(yǎng)基（Brainbits，靶點科技）的錐形管中收集所有的組織。放置，直到所有的組織都已解體。

3. 使組織沉積在管的底部，然后小心地去除上清液，只留下剛好可覆蓋組織的最少量的培養(yǎng)基。

4. 在不含鈣離子的Hibernate E minus Calcium培養(yǎng)基（Brainbits，靶點科技）中，使用2 mg/mL過濾滅菌的木瓜蛋白酶溶液，在30°C酶解組織大約30 min，其間每5 min輕搖錐形管以幫助降解。每對海馬組織使用2 mL酶溶液。

5. 加入兩倍體積的Hibernate E培養(yǎng)（Brainbits，靶點科技）基以恢復(fù)二價陽離子的濃度，停止酶解。

6. 使未解離的組織沉降至管底（約2 min），然后把上清液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，以150×g離心5 min。

7. 在1 mL神經(jīng)元培養(yǎng)基中重懸沉淀物，取一小份(例如10 μL)進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

大鼠胚胎原代海馬和皮層神經(jīng)元操作步驟

1. 用無菌的冷的0.05 mg/mL多聚賴氨酸水溶液包被培養(yǎng)表面(玻璃或細(xì)胞培養(yǎng)級塑料)，每平方厘米表面使用0.15 mL，在室溫下保溫1 h。

2. 去除多聚賴氨酸溶液，并用無菌蒸餾水沖洗兩次(須清洗，因為多聚賴氨酸對細(xì)胞有毒性)。在超凈工作臺中打開培養(yǎng)板的蓋子通風(fēng)，直到每個孔都干燥。培養(yǎng)板干燥后可以立即使用或在4°C最多保存2周。

3. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)實驗室程序或隨細(xì)胞提供的說明書分離原代的大鼠神經(jīng)元或解凍凍存的原代大鼠神經(jīng)元。

4. 在預(yù)熱的(37°C)神經(jīng)元培養(yǎng)基中接種細(xì)胞，建議的細(xì)胞密度為160個細(xì)胞/mm2，或必要時使用自行優(yōu)化的細(xì)胞密度。對于海馬神經(jīng)元，培養(yǎng)基中須添加25 μM L-谷氨酸

5. 在36°C至38°C，含5%二氧化碳的潮濕環(huán)境中培養(yǎng)（使用自然空氣也是可接受的，但推薦含9%氧氣和5%二氧化碳的氣體環(huán)境）。

6. 培養(yǎng)4-24 h后，更換一半體積的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

7.對海馬神經(jīng)元以外的細(xì)胞：在接種4天后，更換一半體積的新鮮的培養(yǎng)基，之后每三天重復(fù)一次。對海馬神經(jīng)元：接種三天后，用不含L-谷氨酸的新鮮培養(yǎng)基更換一半體積的培養(yǎng)基。之后每三天重復(fù)一次。